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『簡體書』细胞生物学实验技术(章静波)(第三版)

書城自編碼: 4113897
分類:簡體書→大陸圖書→教材研究生/本科/专科教材
作者: 章静波、韩钦 主编
國際書號(ISBN): 9787122474063
出版社: 化学工业出版社
出版日期: 2025-06-01

頁數/字數: /
書度/開本: 16开 釘裝: 平装

售價:HK$ 60.5

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內容簡介:
本书前两版被许多院校用作教材,广受师生好评。新版保留了原有的大部分内容,涵盖显微镜技术、组织学基本技术、细胞结构与成分的显示技术、细胞生理实验、细胞培养与分析、干细胞培养及诱导分化、细胞周期分析、细胞成分的分离与分析、细胞工程基础技术、细胞凋亡的测定、染色体技术和分子细胞生物学技术。也根据反馈意见和当前研究热点,新增了类器官培养方法和适用于不同应用场景下的多种外泌体提取技术。这些新增内容不仅反映了技术方法的前沿性,更能让读者能够熟悉与掌握这些新的技术方法,以便在今后的研究中进行更深入和更高层次的探索。新版继续将所介绍的方法分为基本方案、备择方案和支持方案三类,各个学校及有关研究机构可以根据具体情况和实验条件灵活选择和运用。本书可以作为医药院校和相关高等院校的本科和研究生教材,也可供从事细胞生物学研究工作的人员阅读参考。
關於作者:
章静波,中国医学科学院基础医学研究所研究员、教授、博士生导师。《基础医学与临床》杂志主编。从事细胞生物学教学、科研50余年,出版有关著作或译著多部。
目錄
第一章显微镜技术1
基本方案1普通显微镜的构造及使用方法1
基本方案2相差显微镜的构造及使用方法6
基本方案3荧光显微镜的构造及使用方法8
基本方案4透射电子显微镜与超薄切片技术11
基本方案5扫描电子显微镜与样品制备15
备择方案1激光扫描共聚焦显微镜的构造及使用方法18
备择方案2激光捕获显微切割技术25
支持方案显微摄影技术27
第二章组织学基本技术30
基本方案1石蜡切片技术30
基本方案2冰冻切片技术32
基本方案3苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色技术33
备择方案1吉姆萨(Giemsa)染色技术35
备择方案2组织学切片的福尔根(Feulgen)染色技术35
备择方案3中性脂肪油红O显示(oil red O staining)技术37
备择方案4组织切片的碱性磷酸酶染色技术(ALP钙-钴法)38
备择方案5组织切片的琥珀酸脱氢酶染色(SDH staining)技术39
备择方案6组织切片的核酸甲苯胺蓝显示技术40
第三章细胞结构与成分的显示技术41
基本方案1细胞中DNA和RNA的显示41
基本方案2细胞中过氧化物酶的显示45
基本方案3细胞中碱性蛋白质的显示46
基本方案4一氧化氮合酶的显示47
基本方案5细胞中线粒体的活体染色51
基本方案6细胞中糖类和脂类的显示52
基本方案7酸性磷酸酶的显示54
备择方案1细胞中液泡系的活体染色55
备择方案2培养细胞完整生物膜系统的观察56
备择方案3微丝的染色及形态观察57
支持方案间接免疫荧光技术显示胞质微管59
第四章细胞生理实验62
基本方案1细胞的运动62
基本方案2细胞的吞噬活动63
基本方案3细胞自噬检测方法65
备择方案细胞膜通透性的测定68
第五章细胞培养和分析71
基本方案1细胞的原代培养71
基本方案2培养细胞的形态观察和计数74
基本方案3培养细胞生长曲线的绘制和分裂指数的测定77
基本方案4细胞集落形成实验79
基本方案5器官培养方法80
基本方案6鸡胚尿囊培养法83
备择方案1细胞的传代培养85
备择方案2MTT对细胞生长状况的检测86
备择方案3表皮细胞的培养87
备择方案4骨骼肌细胞的培养89
备择方案5内皮细胞的培养90
备择方案6神经胶质细胞的培养91
备择方案7骨髓间充质干细胞的培养及其体外诱导分化92
支持方案1细胞的冻存与复苏93
支持方案2细胞显微测量技术95
支持方案3细胞培养中支原体污染的检测96
支持方案4放射自显影术及同位素液闪测定100
第六章干细胞培养及诱导分化106
基本方案1人胚胎干细胞传代培养106
基本方案2人胚胎干细胞的诱导分化108
基本方案3肿瘤干细胞的分离纯化113
备择方案1诱导多能干细胞118
备择方案2类器官的培养与传代120
支持方案小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离及饲养层的制备123
第七章外泌体的提取和鉴定127
基本方案1细胞上清液准备127
基本方案2采用超速离心法提取外泌体128
基本方案3采用超滤法提取外泌体129
基本方案4采用电镜观察外泌体形态130
基本方案5采用纳米颗粒跟踪分析(NTA)鉴定外泌体粒径130
第八章细胞周期分析132
基本方案流式细胞仪检测细胞周期132
备择方案1细胞同步化实验134
备择方案2通过分析CDK的活性检测细胞周期135
第九章细胞成分的分离与分析139
基本方案1差速离心法分离细胞和细胞器139
基本方案2密度梯度离心法分离细胞组分141
基本方案3SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质143
基本方案4Western印迹技术144
备择方案免疫沉淀法146
支持方案蛋白质的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳147
第十章细胞工程基础技术152
基本方案1细胞融合实验152
基本方案2单克隆抗体的制备155
备择方案1染色体提前凝集标本的制备159
备择方案2显微注射技术(核移植)161
备择方案3DNA转染实验(绿色荧光蛋白)163
支持方案体外受精技术167
第十一章细胞凋亡的测定171
基本方案1凋亡细胞的普通光镜观察171
基本方案2凋亡细胞的荧光显微镜观察173
基本方案3凋亡细胞的琼脂糖凝胶电泳检测——DNA梯状条带175
备择方案1凋亡细胞的电镜观察176
备择方案2凋亡细胞的原位末端标记法检测177
备择方案3凋亡细胞的单细胞凝胶电泳检测178
备择方案4凋亡细胞的流式细胞法检测180
支持方案磷脂酰丝氨酸外化的流式细胞术分析181
第十二章染色体技术183
基本方案1染色体标本制备183
基本方案2端粒及端粒酶显示技术186
备择方案1染色体显带技术196
备择方案2性染色质的制备201
备择方案3姐妹染色单体交换实验204
备择方案4染色体原位杂交技术205
支持方案染色体实验试剂配制207
第十三章分子细胞生物学技术210
基本方案1DNA提取及检测210
基本方案2RNA提取及检测213
基本方案3Southern印迹技术214
基本方案4Northern印迹技术218
基本方案5RNA干扰技术221
基本方案6酵母双杂交技术225
备择方案1RT-PCR230
备择方案2原位PCR技术231
备择方案3荧光定量PCR技术234
备择方案4基因芯片技术236
备择方案5原位缺口平移技术241
备择方案6染色质免疫沉淀法243
备择方案7昆虫杆状病毒表达系统247
备择方案8GST pull-down分析251
参考文献254
內容試閱
前言
时光荏苒,转眼间《细胞生物学实验技术》(第二版)已陪伴大家走过了十余载。在这段旅程中,我们见证了细胞生物学领域又取得了一系列激动人心的创新与突破,例如类器官培养、外泌体的分离与研究、单细胞测序技术的发展及细胞重编程的突破。这些进展不仅拓宽了我们的研究视野,还深化了我们对细胞功能和机制的理解。正如我们在前几版的前言中所强调的,学科的发展离不开技术方法的创新与改良。只有依靠更精细的技术方法,我们才能揭示出细胞生物学的本质变化规律以及各事件之间的相互联系。因此,技术方法与学科发展密不可分,彼此促进,共同进步。
为了紧跟学科的发展步伐,适应新时代的需求,我们欣然推出《细胞生物学实验技术》(第三版)。本版的定位依然是适合普通高等院校及医药院校研究生与本科生学习细胞生物技术方法的需要。本版特点是在保持基础训练的同时,增加了最新且最重要的新技术。该版继续遵循“三基”与“五性”的原则,即基本知识、基本理论和基本技能,以及思想性、科学性、创新性、启发性、先进性。在本版中,我们保留了原有的大部分内容,并根据反馈意见和当前研究热点,新增了类器官培养方法和适用于不同应用场景下的多种外泌体提取和鉴定技术。这些新增内容不仅反映了技术方法的前沿性,更让读者能够熟悉与掌握这些新的技术方法,以便在今后的研究中进行更深入和更高层次的探索。
基于过往对教材的编纂经验与读者反馈,我们在本版中继续保留了《精编细胞生物学实验指南》(Short Protocols in Cell Biology, edited by Juan S. Bonifacino et al, John Wiley & Sons Inc,2004)的分类方法,将所介绍的方法分为基本方案、备择方案和支持方案三类。基本方案是指总体推荐或是最普遍应用的方法,是使用者应力求掌握的方法。备择方案是针对不同设备和试剂而达到相同结果时的可选方法,或是对基本方案的补充和佐证。支持方案则是进行基本方案或备择方案所需要的附加步骤。这些步骤独立于核心方案,可能在其他实验中也能用到。这种分类方式强调了各类方案在证明一种现象中所起的作用不同,以及学习者应掌握的不同程度。各个学校及有关研究机构可以根据具体情况和实验条件灵活选择和运用。
最后,我们衷心感谢所有参与本书编撰和出版的专家、学者与编辑团队,是你们的智慧与汗水铸就了这本教材。我们同样感激每一位读者的支持与信任,你们的反馈与建议是我们不断前行的动力源泉。我们诚望使用者能够从本书中获益,并对我们的不足和疏漏之处提出宝贵意见。
希望本书能够成为广大研究生和本科生今后从事科学研究的敲门砖,助力他们在细胞生物学领域的探索中取得更大成就。
章静波 韩钦
2025年1月

第一版前言
技术方法对于科学发展的重要性是不言而喻的。有人将技术方法比喻为机车的车轮,设计再好的机车,没有车轮是不可能行进的。较生动的比喻大概要算将技术方法比作“点石成金”的指头,金子再多也有用完的时候,而这“指头”的魔力则是无穷尽的。我更愿意将技术方法与科研思路比喻为鸟儿的双翼,想要到达终极目标,两者缺一不可。
细胞生物学学科的发展,同样离不开新的技术方法的建立。只有应用显微镜观察到植物和动物的细胞结构,才有了细胞学说(恩格斯将其列为19世纪“三大发现”之一)的创立;只有有了X射线衍射技术方能揭示出DNA的双螺旋结构模式,并从此开辟了分子细胞生物学的新纪元;只有有了核移植技术,才有克隆动物(或许将来还有克隆人)的问世。由上我们可以得出这样的结论:没有精湛的技术方法,就不能(至少很难)登上科学的殿堂。或许正是认识到这一点,美国冷泉港实验室在取得众多科研成果、培养了大量科技人员之外,也没有忽视出版一批技术方法的书籍,诸如《分子克隆》(Molecular Cloning)、《细胞实验指南》(Cell:A Laboratory Manual)和《抗体》(Antibodies)等。有人评价这些书籍是生命科学研究的“圣经”。
细胞生物学及相关学科在我国的发展极为迅速。迄今我国有不少世界一流的实验室,也取得了一些世界一流的科研成果,但总体来说,我国细胞生物学的研究与世界最前列还有一定的差距。当然其原因是多种多样的,缘由是复杂的。我们相信,我国科研人员的头脑与国外的同行一样优秀,这些差距可能出于我们的技术设备要差一点,所掌握的技术方法尚不够精良与全面,因此做起科学研究来往往要滞后一些。为了缩小这种与最先进实验室的差距,学习与掌握最基础与最先进的研究技术方法,不能不说是一条重要的途径。编写一部新颖、实用的技术方法指导,不失为适时的一种举措。
本书的大部分作者曾参与《医学细胞生物学实验指导》的编写,他们既有从事科研工作的经验,又有教学经历,他们在具有丰富的感性认识与理性认识的基础上,从众多的技术方法中精选出部分操作程序介绍给读者。相信这些程序均具有严密性、可重复性、可操作性以及一定的新颖性。因此书中介绍的实验技术无论对于一个初涉细胞生物学研究的新手,还是具有丰富实验室工作经验的科研工作者,都有一定的帮助。
诚然,细胞生物学作为21世纪最活跃的生物科学学科之一,新理论以及新技术方法不断涌现,本书不能穷尽所有方法,也不一定包含刚刚问世的最新技术,它只能引导读者进入细胞生物学的研究领域,今后更多的理论创建与技术方法的革新便有待于大家的努力了。另外,我们并不固执己见,并不认为我们所提供的操作程序是不可变更的,如果使用者在正确的理论指导下,对我们提供的技术方法做出某些修改,并且证明更行之有效,那么请不吝将您宝贵的意见反馈给我们,以便我们能以适当的方式采纳,使本书所提供的技术方法更加先进,更加完善。
最后,我们要感谢那些虽不是本书的作者,但提供某些有用信息,包括文字数据、图片的人们,他们的无私奉献为本书增色。我们更要感谢化学工业出版社现代生物技术与医药科技出版中心的编辑们,他们为出版“生物实验室系列”图书所表现出的敬业精神,是我们编写《细胞生物学实验技术》的动力之一,与他们的精诚合作是一件颇为愉快的事,是以不能不在此书真诚地写上一笔以记之。
章静波
2006年2月5日

第二版前言
自《细胞生物学实验技术》(第一版)问世以来,已5年过去了。我们见证了细胞生物学领域又有诸多的重要进展,譬如端粒与端粒酶的研究、诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)的研究、组学革命(omics revolution)、细胞自噬的深入研究等。正如前一版前言中,我们强调指出学科的发展是与技术方法的创新与改良密不可分的,只有有了更精细的技术方法才能揭示出事物的本质变化的规律、事件之间的相互联系。因此技术方法与学科发展是一对孪生兄弟,是比翼双飞的鸟儿,缺一不能共存、缺一不能远翔。上述所列的一些新进展也是和新技术方法出现分不开的。
为了跟上学科的发展,适应发展的需要,我们也与时俱进地推出《细胞生物学实验技术》(第二版),我们对该版的定位是:适合大多数院校(普通高等学校及医药院校)研究生与本科生学习细胞生物技术方法的需要。因此,该版的特点是:以基础训练为主,同时增加最新而又不难掌握与了解的技术,也就是说我们所遵循的仍是“三基”与“五性”的原则。为此,在本版中除了保留原有大部分内容之外,根据反馈意见增加了作为生物学与医学研究最基本手段的组织学切片及基本染色技术。此外,我们也适时地补充了多种干细胞的培养方法、鉴定及运用,其中包括诱导多能干细胞和肿瘤干细胞培养、细胞自噬、端粒与端粒酶显示技术、酵母双杂交技术、昆虫杆状病毒表达系统等,这不仅反映了技术方法的时代性,更让使用者能够熟悉这些新的技术方法,以便今后能进行更深入、更高层次的探索。
此外,由于有时为了证明某一现象可以有多种方法,其中有些是最常用的,或者是最可靠的,或是对于初学者必须掌握而且容易掌握的,有些则是“辅助性的”,或是“佐证性的”,为此本版也尝试采用如同《精编细胞生物学实验指南》(Short Protocols in Cell Biology,edited by Juan S. Bonifacino et al, John Wiley & Sons Inc,2004)那样将所介绍的方法分为基本方案、备择方案和支持方案三类。基本方案是指总体推荐或是最普遍应用的方法,也是使用者应力求掌握的方法。备择方案乃针对采用不同设备和试剂而达到相同结果时可选用者,或许可以认为它是基本方案的一种补充与佐证。支持方案所描述的是进行基本方案或备择方案所需要的那些附加步骤,这些步骤独立于核心方案,它们或许也可以在其他实验中用到。诚然,这样分类只是强调各种方案在证明一种现象中所起的作用分量有所不同,以及要求学习者必须掌握的程度不一,各个学校可根据具体情况、实验条件灵活选择运用。
最后,我们十分感谢参加编写的全体新老编委们,是他们的高度责任心与不厌其烦的不断修改才使得第二版以新的面貌问世。我同样感激化学工业出版社生物·医药出版分社的编辑们,是他们的耐心指导与建议,才让我们又一次燃起再版的热情,并付出坚持到底的努力。我们诚望使用者从本书中获益以及对我们的不足与错误之处提出批评。
章静波
2011年夏于北京协和医学院

 

 

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